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據(jù)說韓春雨公開了武功秘籍

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據(jù)說韓春雨公開了武功秘籍

摘要: 這是我從網(wǎng)大轉(zhuǎn)發(fā)的一個消息，本人不對其信息真實性負責(zé) 三個月前，河北科技大學(xué)副教授韓春雨在《自然-生物技術(shù)》上發(fā)表了 NgAgo 酶對哺乳動物進行基因編輯的論文（F. Gao et al. Nature Biotechnol. 34, 768 ...
三個月前，河北科技大學(xué)副教授韓春雨在《自然-生物技術(shù)》上發(fā)表了 NgAgo 酶對哺乳動物進行基因編輯的論文（F. Gao et al. Nature Biotechnol. 34, 768–773; 2016）。文章介紹了一種新型的基因編輯方法，迅速引起廣泛關(guān)注。

然而，隨著時間推移，研究的可重復(fù)性問題為韓春雨團隊招致諸多質(zhì)疑。8月2日，《自然-生物技術(shù)》宣布將按照既定流程對研究進行調(diào)查。8月8日，韓春雨向質(zhì)粒共享信息庫 Addgene 提交新版的詳細實驗方法，其中補充了數(shù)項應(yīng)特別注意的問題。

（新版實驗方法全文，可至 https://www.addgene.org/static/data/plasmids/78/78253/78253-attachment_OG34WIqLRecj.docx 下載）。

新版實驗方法具體分為細胞培養(yǎng)、質(zhì)粒/gDNA 共轉(zhuǎn)染，以及基因組提取三個部分。對比《自然-生物技術(shù)》上 NgAgo 論文 Supplementary Information 中描述的 methods，新實驗步驟有幾處改變：


1   血清品牌由 Hyclone 變更為 Gibco 。


2   增加了關(guān)于“293T 細胞貼壁不牢，換液時要小心操作”的小提示。


3   建議在質(zhì)粒/gDNA共轉(zhuǎn)染的8小時、12小時或24小時后，補轉(zhuǎn)一次 gDNA；舊版方法中只提及了“24小時”。


4   舊版方法中，溶解和稀釋質(zhì)粒及 gDNA 的緩沖液為含有 EDTA 的0.5xTE（5 mM Tris-HCl,  0.5 mM EDTA,  pH 8.0），而新方法中則變更為水（pH 8.0）。


最后一處緩沖液配方的改變尤其引人注意——在韓春雨補充在實驗步驟之后的四條注意事項中，EDTA 再次出現(xiàn)：其中一條注意事項專門提到，應(yīng)該避免向 NgAgo/gDNA 系統(tǒng)中加入 EDTA。這四條注意事項分別是：


1   NgAgo/gDNA 系統(tǒng)對細胞中胞內(nèi)菌和支原體感染敏感，在實驗前要仔細確認所使用的細胞株未被污染或污染已被徹底清除。


2  由于 NgAgo/gDNA 系統(tǒng)需要鎂離子，在細胞消化和培養(yǎng)過程中要避免使用金屬離子螯合劑 EDTA。也可以在培養(yǎng)基中額外加入 5 mM或其他濃度的鎂離子。


3  轉(zhuǎn)染試劑 Lipofectamine® 3000會阻礙 gDNA 進入細胞，不能用于轉(zhuǎn)染�？梢允褂棉D(zhuǎn)染試劑 Lipofectamine® 2000。其他轉(zhuǎn)染試劑是否可用還有待驗證。

4 建議使用 T4 PNK (Biolab) 對 gDNA 進行5’端磷酸化處理，處理體系如下：（體系略）處理后的 gDNA 無需再次純化，直接用水（pH 8.0）稀釋至300 μl，終濃度10 nM。

據(jù)說韓春雨公開了武功秘籍  |  責(zé)任編輯：蟲子
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