韓國科學(xué)技術(shù)院Yong-Sam Kim團(tuán)隊(duì)利用超小型Cas12f1和經(jīng)設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA通過腺相關(guān)病毒傳遞實(shí)現(xiàn)高效的CRISPR編輯。相關(guān)論文于2021年9月2日在線發(fā)表于國際學(xué)術(shù)期刊《自然—生物技術(shù)》。
研究人員重新設(shè)計(jì)了Un1Cas12f1的天然引導(dǎo)RNA的五個部位：反式激活CRISPR RNA（tracrRNA）的5′末端、tracrRNA-crRNA互補(bǔ)區(qū)、一個五（尿苷酸）序列、crRNA的3′末端和tracrRNA中一個無序的莖2區(qū)。這些優(yōu)化措施協(xié)同地使平均的插入缺失頻率增加了867倍。優(yōu)化后的Un1Cas12f1系統(tǒng)在通過質(zhì)粒載體、PCR擴(kuò)增子和腺相關(guān)病毒（AAV）傳遞時，能夠在人類細(xì)胞中進(jìn)行高效、特異的基因組編輯。由于Un1Cas12f1在原生質(zhì)粒之外進(jìn)行切割，它可以被用來有效地創(chuàng)建大的缺失。工程化的Un1Cas12f1系統(tǒng)顯示出與SpCas9相當(dāng)?shù)男屎团cAsCas12a相似的特異性。
據(jù)了解，基因治療將受益于一個微型的CRISPR系統(tǒng)，它適合于小型AAV的基因組，并且在真核細(xì)胞中具有高切割活性和特異性。目前發(fā)現(xiàn)的最緊湊的CRISPR相關(guān)核酸酶之一是古細(xì)菌Un1Cas12f1。 然而，Un1Cas12f1及其變體在真核細(xì)胞中的活性非常低。 超小型Cas12f1通過腺相關(guān)病毒傳遞實(shí)現(xiàn)高效的CRISPR編輯 | 責(zé)任編輯：蟲子 |